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極性改性反相色譜柱的維護

極性改性反相色譜柱使用過程中不能碰撞、彎曲或強烈震動。當柱子和色譜儀連結(jié)時,閥件或管路一定要清洗干凈。以下從流動相、樣品、保護柱等方面提出色譜柱維護應(yīng)注意的一些問題。

(1)流動相:流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理。即使儀器配有自動脫氣機,也采用超聲脫氣或其它簡便的脫氣方法對流動相進行預(yù)脫氣。盡量避免使用高粘度溶劑(如異丙醇)作為流動相,避免流動相組成及極性的劇烈變化。流動相應(yīng)盡量使用色譜純,減少流動相中雜質(zhì)對色譜柱的污染和對檢測器的影響。水用超純水,流動相用0.45μm或0.22μm的膜過濾。大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2～7.5,硅膠柱pH>8時會發(fā)生硅膠溶脫,鍵合型柱pH<2時會發(fā)生鍵合相斷裂,流動相盡量不超過色譜柱的pH范圍。普通C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析。柱內(nèi)不溶物容易引起色譜柱的堵塞,影響樣品的分離。不溶物產(chǎn)生的原因是有溶劑的不互溶、樣品溶解液和流動相不互溶或者由于溫度改變或固定相干涸而產(chǎn)生沉淀。為避免上述問題,要注意溶劑之間的互溶性。若兩種溶劑不互溶,需經(jīng)過中間溶劑慢慢過渡。保存時應(yīng)將色譜柱兩端密封,并盡量保持室溫恒定。

 

(2)樣品:對內(nèi)徑5μm的柱子,樣品需經(jīng)0.45μm的膜過濾,更細的柱子要0.22μm的膜過濾。基體比較復(fù)雜的樣品需經(jīng)過一定的樣品預(yù)處理,例如海洋沉積物、中藥提取液、體液等,需要采用萃取等方法除去對柱子有損壞的較大雜質(zhì),例如色素、多糖、蛋白質(zhì)等。盡量減少進樣量,避免過載。

 

(3)保護柱:使用預(yù)柱作為保護柱,減少污染物對分析柱的損傷。壓力升高通常是需要更換預(yù)柱的信號。